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农残级正己烷生产厂家:色谱法的几种常见类型

  2020-12-21 14:11:07 阅读:78
色谱法是一种分离分析技术,通过将样品中的组分分离,再逐个分析,因此是分析混合物、检测化…

色谱法是一种分离分析技术,通过将样品中的组分分离,再逐个分析,因此是分析混合物、检测化合物纯度的有力手段,因而在药物研发中广为应用,包括原料药、中间体、制剂和生物体液中化合物的定性和定量,涉及的待测物包括手性或非手性药物、过程杂质、残留溶媒、附加剂(如防腐剂)、分解产物、从容器和密闭包装或制造过程中带入的杂质、植物药中的农药和代谢物等,包括制备工艺研究、中间体控制、质控检验、稳定性及药物动力学研究等过程。因此,色谱方法在药物研发中占据举足轻重的地位。农残级正己烷生产厂家彪仕奇带您了解色谱法的几种常见类型。

1HPLC法:

1)手性液相色谱
将“手性识别”或“手性环境”引入色谱系统中,以形成暂时非对映异构体复合物,从而直接分离药物对映体;或将对映体衍生化生成非对映体,而得以分离。即分离光学异构体可用手性固定相、衍生化后在非手性固定相上或在非手性固定相上用流动相手性添加剂形成非对映体来实现。

2)离子交换色谱
使用表面有离子交换基团的离子交换剂作为固定相。带负电荷的交换基团(如磺酸基和羧酸基)可以用于阳离子的分离;带正电荷的交换基团(如季胺盐)可以用于阴离子的分离。不同离子与交换基的作用力大小不同,在树脂中的保留时间长短不同,从而被相互分离。可用pH程序洗脱。

3)离子对/亲和色谱
常用反相离子对色谱,用缓冲液和加入的对离子(与被分离的样品荷相反电荷)分离。分离受pH、离子强度、温度、浓度和共存的有机溶剂类型的影响,亲和色谱,一般用于大分子,使用配合体(共价结合在固体基质上的生物活性分子),与其同类的抗原(分析介质)反应,生成可逆转的复合物,通过改变缓冲条件洗脱。

4)正相色谱
将各种不同的有机官能团通过化学反应共价结合到固定相惰性载体上,固定相极性>流动相极性。常用固定相:二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。适于分离水溶性的极性、强极性化合物,此时较小极性的组分比较大极性组分更快地洗脱。

5) 反相色谱
将各种不同的有机官能团通过化学反应共价结合到固定相惰性载体上,固定相极性<流动相极性。常用固定相:烷基、苯基等非极性有机分子,最常用ODS柱或C18柱,其极性很小,适于分离非机性、弱极性离子型样品。是目前药物研发中液相色谱的主要分离模式,通常用紫外检测器,用水作基本溶剂,选择性受溶剂强度、柱温和pH的影响,一般来说较大极性比较小极性组分洗脱更快。

紫外检测器可以用于各类液相色谱,这类检测器要注意的是氘灯老化后的灵敏度降低,其灵敏度因仪器的设计和/或者制造厂家的不同而异。用紫外检测器和反相HPLC组合得到的色谱图不一定能真实的反映实际情况,原因是:①极性比目标化合物大得多的化合物可能被掩盖(在溶剂前沿或死体积时同时洗脱);极性比目标化合物小得多的化合物洗脱出来晚,甚至保留在柱上。为避免此情况发生,最好使用梯度洗脱法。②无紫外吸收或在检测波长处吸收相差较大的多种化合物,有时在某一检测波长处不能被检出,因为通常只用一个检测波长。为避免此情况发生,可改用其它类型检测器,如示差折光检测器;流动相许可时,最好使用蒸发光散射检测器。

6) 分子排阻色谱
以多孔凝胶(如葡萄糖,琼脂糖,硅胶,聚丙烯酰胺等)作固定相,依据样品分子量大小达到分离目的。大分子不进入凝胶孔洞,沿多孔凝胶胶粒间隙流出,先被洗脱;小分子进入大部分凝胶孔洞,在柱中被滞留,后被洗脱。

根据样品性质可分为两类:凝胶过滤(GFC)—用于分析水溶性样品,如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核苷酸、多糖;凝胶渗透(GPC)—用于分析脂溶性样品,如测定高聚物的分子量。SEC主要依据分子量大小进行分离,因此与样品、流动相间的相互作用无关,因此不采用改变流动相的组成来改善分离度。

2、气相色谱(GC)

气相色谱基于挥发性样品由作为流动相的载气运载,通过色谱柱内的固定相时发生吸附和解吸附过程进行分离。

通常GC分析的样品是低分子量、易挥发、高温稳定的化合物。药物和药物制剂中的残留溶剂适于GC分析。常用的检测器有用于含碳化合物的火焰离子化检测器(FID),用于卤化物的电子捕获检测器(ECD),用于含硫或磷化合物的火焰光度检测器(FPD),以及用于含氮或磷化合物的氮磷检测器(NPD)。填充柱已多被毛细管取代来改进分离度和分析时间,分析物位置与HPLC一样,用保留时间(Rt)表示。

3、薄层色谱(TLC)

薄层色谱是一种最简便普通的色谱技术,系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上,成一均匀薄层,待点样、展开后,与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比,用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定(已少用)的方法。对于本身没有颜色的化合物,检出技术包括荧光、紫外和喷雾显色剂。分析物在薄层板上的位置用Rf值(化合物的展开距离与溶剂前沿的比值)来表示。

农残级正己烷生产厂家彪仕奇认为,三种方法中,薄层色谱最普通,因为薄层板上所有的组分都可用适宜的检测技术检出,但通常不如HPLC准确和灵敏。虽然选用适宜的检测技术,TLC法能见到分析的“全图”(whole picture),但分析变异比HPLC大。

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