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分析样品前处理专家彪仕奇:分析样品前处理哪家好?

  2020-05-11 16:15:38 阅读:33
分析样品前处理哪家好?样品前处理对分析检测实验员来说是至关重要的一环,占据60%以上的分析…


   分析样品前处理哪家好?
样品前处理对分析检测实验员来说是至关重要的一环,占据60%以上的分析时间,主要的分析误差也是来自样品前处理环节。分析样品前处理专家彪仕奇首先要提到的是微量样品前处理技术,毕竟微量样品前处理更需要技巧。

分析样品制备技术:

针头过滤器、超速离心是除去固体颗粒的微量样品前处理技术,而固相萃取(Solid-phaseextractionSPE)和固相微萃取(Solid-phasemicro extractionSPME)是两种从各类复杂样品中提取净化微量待测组分的新技术,它们具有分离速度快、操作简单、萃取效率高、无乳化等特点,在环境分析、药物分析、形态分析等方面有广泛应用,尤其适用色谱分析样品前处理。

 

分析样品制备技术:将采集样品转化为适合(色谱)分析测定的形态

1)固相萃取(张海霞、朱彭龄,分析化学2000289):1172

它的优点是回收率高,节省时间,交叉污染机会小,重现性好,特别适用于微量试液处理。

固相萃取的关键是根据样品的性质正确选择固相萃取小柱及洗脱条件。

2)固相微萃取

固相微萃取集采样、萃取、浓缩、进样于一体,能够与气相色谱或高效液相色谱仪联用样品前处理技术。

蛋白质的分离、纯化对蛋白质结构功能研究具有重要意义,蛋白质分离技术是利用蛋白质的特性,如,溶解度、分子质量大小、等电点、吸附特性和其它离子的生物亲和力等的不同,选择合适的分离模式并建立最佳的纯化方法。常用的分离方法包括沉淀法、色谱法和电泳及毛细管电泳。

分析样品前处理专家彪仕奇样品处理:测定蛋白质中的总氨基酸,必须先把蛋白质水解成游离氨基酸。可采用酸水解、碱水解和酶水解方法,其中以酸水解法应用最广泛。

1)酸水解

条件:常用硫酸或盐酸进行水解。一般用6mol/LHCl4mol/L H2SO4煮沸回流24小时左右。

优点:可蒸发除去盐酸,水解彻底,终产物为L-α-氨基酸,产物单一,无消旋现象。

缺点:色氨酸破坏,丝氨酸和苏氨酸有一小部分被水解,同时天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基被水解下来。

2)碱水解

条件:分析色氨酸可采用碱水解法,一般与5mol/L NaOH煮沸1020小时。

优点:水解彻底,色氨酸不被破坏,水解液清亮。

缺点:产生消旋产物,破坏的氨基酸多 

3)酶水解

某些氨基酸对酸或碱不稳定,在酸或碱水解时易被破坏,某些蛋白质样品在酸或碱水解不完全,影响某些氨基酸的回收率。对这些样品可采用酶水解法。酶水解法可定量测定天东氨酸、谷氨酸和色氨酸。

条件:蛋白酶,如,胰蛋白酶、糜蛋白酶,常温3740℃, pH5 

优点:氨基酸不被破坏,不发生消旋现象。 

缺点:水解不完全,中间产物多。

生物样品分析前处理技术

为什么要进行前处理?

存在形式多样:

游离型药物、与蛋白质结合型药物、代谢物、葡萄糖醛酸苷、硫酸酯缀合物等。

成分复杂:

蛋白质、糖、脂肪、尿素、Na+K+X-等。

1)去除蛋白质

释放结合型药物、减少提取过程中乳化、保护仪器、提高灵敏度。。。

加入与水混溶的有机溶剂

中性盐

强酸

加入含锌盐、铜盐的沉淀剂

酶解法

2)缀合物的水解

酸水解/酶水解

3)有机破坏

测定生物样品中的金属离子,常用HNO3-HClO4作为消解剂,一般得到高价态金属离子。

4)分离、纯化和浓集

使被测物在所用分析技术的检测范围内,常用萃取法:

-液萃取法(LLE

-固萃取法(LSE

相当于缩小的柱色谱法

浓集

末次萃取液尽量少

挥去萃取溶剂

5)化学衍生化

可使药物:灵敏度高、稳定性强,对光学异构体分离的能力高,具有能被分离的性质

 

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